Pannarase耐高盐全能核酸酶是一种非特异性核酸内切酶，该酶产品是从大肠杆菌菌株BL21中表达纯化得到。该蛋白酶是由149个氨基酸构成的单链多肽，分子量为16.8 kDa，Ca2+和Mg2+可以稳定其构象。该酶可以将任何形式的DNA和RNA（线性、环形、超螺旋）降解成3’-单核苷酸及二核苷酸，并可在一系列宽泛的操作条件下保持高效性。本产品可用于盐浓度较高、偏碱性的病毒下游纯化。
产品性质：
项目 | 描述 |
规格 | 10万/50万/500万 U/管 |
分子量 | 16kDa |
纯度 | ≥99% (SEC-HPLC) |
比活性 | ≥2x106 U/mg |
最适pH | 8.5-10 |
最适温度 | 37°C |
辅助因子 | 0.55-5 mM Mg2+；0.5-10 mM Ca2+ |
储存温度 | -20°C，避免反复冻融 （由于甘油的存在，-20°C条件下不会冻住） |
活力单位：通过测定其裂解鲱鱼精DNA底物的能力（herring Sperm DNA， Sigma，目录号D7290）一个单位Pannarase全能核酸酶活力定义为在37°C pH8.0反应条件下30分钟内导致A260值降低1.0（相当于完全消化37μg DNA）。
产品特点：
SDS-PAGE鉴定：
非还原及还原的SDS-PAGE显示蛋白分子量约16kDa，未见杂蛋白。
SEC-HPLC纯度测定：
尺寸排阻色谱显示高纯度，无聚集体产生。
应用案例：
1. Na+离子对Pannarase酶活性的影响
Pannarase在中等Na+浓度条件下活性较高，300 mM时仍有36.2%的活性，但浓度超过600mM时酶活性基本完全丧失。
2. Mg2+离子对Pannarase酶活的影响
1 mM Mg2+可以提升Pannarase内切酶40%左右的活性，但Mg2+并不是必须的
3. Ca2+离子对Pannarase酶活的影响
1 mM Ca2+可以提升Pannarase内切酶28%的活性，但Ca2+并不是必须的
4. 不同pH条件下Pannarase酶活性比较
Pannarase酶活性最适pH为pH8.0 - 11.0
运输和保存方法：干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存，有效期2年。
推荐使用条件：
条件 | 最适条件* | 有效条件# |
Mg2+ | 0.55-5 mM | 0-10 mM |
Ca2+ | 0.5-10 mM | 0-10 mM |
pH | 8.5-10 | 7.0-11.0 |
Na+ | 0-150 mM | 0- 500 mM |
*“最适条件”指的是在此条件下Pannarase核酸酶可保持>90%的活性
**“有效条件”指的是在此条件下Pannarase核酸酶可保持>15%的活性
注：具体参数可参见Pannarase 产品性能部分
使用方法：
1.对于大肠杆菌破碎液
为了达到降低粘度的目的，加入核酸酶的用量须根据破碎液的菌体浓度来决定，如果菌体浓度在50%，建议加入的核酸酶的量为1：1000-5：1000，即50万-250万U/L。如果菌体浓度在5%，则可以按照1：10000-5：10000的比例加入。
2.对于细胞裂解液
可以按照106-107个细胞加入500单位核酸酶。
3.对于纯化后的腺病毒或者病毒疫苗
由于DNA含量相对较少，可以按照万分之一到万分之五也就是每毫升5个单位的最终浓度加入。
注意事项：
1.酶的最佳作用条件为pH 8.0–11.0，37°C，30min。
2.酶活性比较稳定，室温放置短期内不会有太大影响，长时间保存需放置在-20°C冰箱内。酶用不含甘油缓冲液稀释后尽快使用，不推荐冻存后再使用。
3.对于仅为降低粘度为目的，可以直接加入核酸酶，室温缓慢搅拌30 min。
订购信息：
产品货号 产品名称 级别 产品规格 CY006F0010 Pannarase耐高盐全能核酸酶 科研级 100 kU CYG006F0010 Pannarase耐高盐全能核酸酶 GMP级 100 kU CYG006F0050 Pannarase耐高盐全能核酸酶 GMP级 500 kU CYG006F0500 Pannarase耐高盐全能核酸酶 GMP级 5000 kU
Q:使用后如何灭活或去除耐高盐全能核酸酶？
A:由于SAN的等电点很高(9.6)，可以很容易地用离子交换色谱法去除酶。热灭活不是很有效。在70°C时，SAN的半衰期约为2小时，但SAN易受还原剂的影响，这些还原剂如DTT或TCEP可以增强酶的热失活。加入螯合剂也会抑制SAN活性。
Q:耐高盐全能核酸酶是否可以用于病毒载体的纯化，例如基于AAV的载体？
A:是的，这种内切酶适合用于病毒载体的纯化。病毒载体的纯度在细胞或动物的体内转导之前至关重要。盐通常是通过最小化聚集和增加目标产量来实现高度纯化载体的重要组成部分。SAN高质量与使用高盐条件高度兼容。
Q:与非盐活性核酸酶相比，耐高盐活性SAN的优点和缺点是什么?
A:许多蛋白质缓冲液含有高浓度的盐，以便从蛋白质中释放DNA。与其他核酸酶相比，SAN在高盐浓度下具有最佳活性。因为最优活动依赖于盐，所以在待检测样品中盐含量非常少的情况下，SAN的活性可能不高。
Q:SAN 在含有0.1% Triton® X-100的溶液中具有活性吗？
A:是的。不过活性会降低至正常活性的70%。在0.5% Triton® 中，将几乎没有活性。
Q:SAN在含有10%甘油的缓冲液中有活性吗?
A:有活性，但是活性降低了，约为与不含甘油样品的80%活性。在50%的甘油溶液中，几乎没有活性。
Q:可以用SAN替代Benzonase的所有应用场景吗？
A:在需要在高盐缓冲液中作用的非特异性核酸酶的应用中，SAN可以代替Benzonase。
Q:如何较为直观的判断SAN是否发挥作用？
A:随着SAN降解DNA和RNA，细胞裂解液在视觉上变得不那么粘稠。任何核酸检测方法都可以用于检测核酸的消化效果。
Q:SAN 的最低反应温度是多少？
A:最佳反应温度为37℃。SAN在低温下也很活跃，但反应会慢一些。4℃时的活性约为37℃时活性的5-10%。这可以通过增加反应时间或在反应中使用的酶的量来补偿。
