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Pannarase耐高盐核酸酶 —— 高盐状态下DNA去除的明智选择

发布日期:2022-01-24 浏览量:1686

亲爱的用户,在下游纯化工艺环节中,您是否遇到过这样的问题—利用高盐洗脱的层析样品中的HCD(HostCell DNA,宿主细胞核酸)含量偏高,需要采取相应措施降低其含量。

工艺当中通常会设计在层析操作后,再添加一步核酸酶酶切来去除多余的HCD,那么另外一个问题随之而来,市面上的大多数全能核酸酶并不耐盐,高盐环境下就会失活,酶切效果大大降低。

Pannarase耐高盐核酸酶——高盐状态下DNA去除的明智选择

所谓“工欲善其事,必先利其器”,上海逐典生物技术有限公司自主研发的Pannarase耐高盐核酸酶能完美实现在高盐状态下对样品中HCD的去除,降低工艺难度,提供生产效率。

Pannarase耐高盐核酸酶——高盐状态下DNA去除的明智选择

Pannarase耐高盐全能核酸酶除了具备高浓度盐溶液下的耐受性(500 mM NaCl浓度下依旧能保持15%以上的有效酶活,如下图所示),同时兼具核酸酶其他该有的特性。作为一款无碱基偏好性的广谱全能核酸酶,Pannarase全能核酸酶能将所有类型的DNA和RNA降解为3~5个碱基片段,从而满足监管机构对病毒载体和疫苗中HCD残留的要求。

Pannarase耐高盐核酸酶——高盐状态下DNA去除的明智选择

从工艺角度,一步核酸酶去除HCD与一步层析(或者一步超滤)去除HCD相比,核酸酶的特异性去除HCD效率更高,产品收率更高,同时保护下游层析和过滤装置不受污染,降低料液粘度。

Pannarase耐高盐核酸酶——高盐状态下DNA去除的明智选择

在工艺研发中,核酸酶本身的残留也是客户非常关注的质控指标,为此,逐典推出了配套的Pannarase核酸酶ELISA检测试剂盒,以供检测使用。

Pannarase耐高盐核酸酶——高盐状态下DNA去除的明智选择

本ELISA试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗PANNARASE核酸酶的单克隆抗体包被在酶标板上;分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本,标准品和样本中的PANNARASE核酸酶会与酶标板上的包被抗体充分结合。

洗板后加入生物素化抗PANNARASE核酸酶抗体,该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的PANNARASE核酸酶发生特异性结合;

洗板后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素,生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合;

洗板后加入显色剂底物TMB,若反应孔中样品存在不同浓度的PANNARASE核酸酶,则HRP会使无色TMB变成不同深浅(正相关)的蓝色物质,加入终止液后反应孔会变成黄色;

最后,在λmax=450nm (OD=450nm)处测定反应孔样品吸光度(OD),样本中的PANNARASE核酸酶浓度与OD值成正比,通过四参数拟合软件绘制标准曲线便可计算出样本中PANNARASE核酸酶的浓度。

Pannarase耐高盐核酸酶——高盐状态下DNA去除的明智选择

对比其他品牌的核酸酶ELISA检测试剂盒,逐典Pannarase全能核酸酶检测试剂盒的优势在于:

固相载体直接包埋单抗,抗干扰能力更强,批间一致性更好;

结合生物素化抗体,灵敏度更高;

线性范围宽广,0.15-10 ng/ml;

兼容不同品牌核酸酶的残留检测。


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