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Trypelectase重组胰蛋白酶

Trypelectase重组胰蛋白酶专门为疫苗、病毒载体生产设计,提供高效、非动物源和高质量标准的产品。该胰蛋白酶氨基酸序列与猪胰腺来源的胰蛋白酶一致, 由大肠杆菌 E.coli 重组表达生产。在GMP级别环境中生产的重组胰蛋白酶能高效消化贴壁细胞且不造成伤害,产品质量满足药典要求。

产品信息
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Q&A
应用文献

产品性质:

项目

描述

序列来源

外观

白色结晶性粉末

分子量

23.4kDa

纯度(RP-HPLC

β-trypsin≥70%α-trypsin ≤20%

比活

3800 (U/mg protein)

细菌内毒素

≤5 EU/mg

外源性DNA残留量

≤ 100 pg/mg

微生物限度

5 cfu/g

最适PH

6.8-7.3

辅助因子

CaCl2

级别储存条件

-20℃

活力单位:25℃pH7.6,反应体系3.2ml (1cm 光路),每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个活力单位。


产品特点:

  • GMP级生产环境、符合药典标准
  • 重组生产、非动物源原料
  • 高纯度、高比活


应用案例:

细胞消化试验:

细胞

活力

浓度

消化时间

CT26.WT

98%

0.05%m/V

3min±0.04

HEK293FT

97%

0.05%m/V

3min±0.04


Trypelectase重组猪胰酶对细胞消化过程及传代24h细胞贴壁图片:


CT26.WTHEK293FT在经Trypelectase重组猪胰酶消化3min后解离效果较好,细胞活率显示对细胞伤害较小,不会影响细胞传代。


运输和保存方法:-15℃ ~ -25℃保存,有效期2年。


推荐使用条件:室温或预热。


使用方法:

贴壁细胞消化使用方法:

试剂与耗材:胰酶干粉、溶解液、PBSpH7.4)、0.22μm滤膜

1. Trypelectase胰酶干粉试剂瓶从冰箱取出,恢复至室温(约30min)。

2. 溶解液: 1mM HCl5%山梨醇,pH 3.0,用0.22μm滤膜过滤除菌。

3. 称取干粉,用溶解液小心轻柔地复溶干粉,使溶液胰酶浓度为10mg/ml。

4. 细胞消化Trypelectase胰酶缓冲液配制:

将母液与无菌PBSpH7.41:20 (v/v)混合,此时pH7.4,使之成为0.5mg/mL的胰酶消化液。如需要37℃孵育,可提前将PBS放置37摄氏度孵育后再稀释母液。


订购信息:

产品货号

产品名称

产品规格

CYG005F0001

Trypelectase 重组胰蛋白酶

1g

CYG005F0010

Trypelectase 重组胰蛋白酶

10g

Q:逐典重组胰蛋白酶配置是否需要过滤?

A:需要使用0.22μm滤膜除菌过滤,这个在母液配置和工作液(即稀释后)的配置中都是需要的。

 

Q:逐典重组胰酶产品是否是无菌产品?

A:不是无菌产品,产品COA中是微生物限度标准为100CFU,所以在配置使用前需要进行无菌过滤。

 

Q:逐典重组胰蛋白酶的配置有哪些环节?分几步?

A:重组胰酶从干粉到能直接使用的工作液需要两大环节。第一步:需要配置成低PH的母液,除菌过滤;第二步:再进行中性缓冲液稀释,过滤除菌后就能直接使用了。

 

Q:逐典重组胰酶的主要优点是那些?

A:非动物来源、GMP环境生产、高酶活、高稳定性。

 

Q:逐典重组胰酶的建议使用浓度是多少?

A:配置母液的浓度是10 mg/ml,配置工作液浓度是0.5 mg/ml。

 

Q:逐典重组胰酶产品如何保存?干粉?母液?工作液?

A:一般来说,我们的干粉产品 -20℃保存 2年没有问题, 配成母液-20℃保存 1年没有问题,工作液的话-20℃保存 1-3个月没有问题,临时用放在4℃可保存一周内,但还是建议客户现用现配。

 

Q:消化细胞的胰酶是不是浓度越高越好?

A:不是的,一般来说消化细胞会有一个最佳胰酶浓度,达到最适浓度后浓度升高会伤害细胞。

 

Q:细胞消化时间长是不是意味着胰酶产品性能不行?

A:一般的细胞消化时间3-5min都是很正常的,难消化的细胞10-15min也是存在的。 细胞消化时间长短不能完全决定产品性能,产品的比活、活性、级别、生产技术、以及质量标准等因素都是评判产品性能的条件。

 

Q:如何控制胰酶消化时间?

A:不同细胞对消化液的敏感性不同,胰酶消化的时间也会有差异。胰酶消化时间与胰酶的浓度,是否含EDTA,胰酶的储存时间,胰酶的储存温度,是否反复冻融,消化加入的胰酶体积,消化温度及细胞的密度有关。

 

Q:新细胞如何使用胰酶消化?

A:消化对于新购买的细胞,建议客户先用低浓度的胰酶仔细去摸索一下消化时间,可每隔1分钟镜下观察细胞是否变圆,记录最佳消化时间,下一次操作参考之前的记录来控制时间即可。

 

Q:使用胰蛋白酶的时候加入EDTA是为什么?

A: EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前,用EDTA清洗细胞,以消除来自培养基中所有的二价离子。