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全能核酸酶你会用吗?---核酸酶使用小贴士(三)

发布日期:2023-01-01 浏览量:1035

这一篇,我们为大家带来更深入的核酸酶使用技巧!和大家一起探讨如何在实际使用中更好地调整我们的实验方法,让核酸酶发挥最大的作用!本篇主要在尿素变性条件使用、低温环境以及核酸酶灭活与去除等几个问题上做出解答。


典型应用

·细胞或者基因治疗病毒载体制备流

·新冠灭活疫苗生产过程中宿主DNA的去除

·传统疫苗工艺纯化过程中去除宿主核酸

·细胞或者基因治疗病毒载体制备流程宿主核酸的去除

·重组蛋白纯化或组织细胞样品蛋白提取时去除核酸污染

·与细胞或细菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸,降低溶液粘性,提高蛋白质产量

·减少存放的外周血单细胞(PBMC)的结块现象


让我们来看看Pannarse全能核酸酶在使用上更深入的一些小介绍吧!


1. 当蛋白溶解性差需要变性,变性环境对核酸酶有影响吗?

变性环境如高浓度尿素会影响吗?

Pannarase核酸酶在尿素浓度6M 时,随着时间延长活性会逐渐减少。在7M尿素浓度下,核酸酶15min 后出现变性失活,但在酶失活前多数核酸已降解,可通过提高核酸酶浓度补偿高浓度尿素影响。


2. 当反应温度低于37℃时,如何保证核酸酶消化效果?

低于37℃如何保证核酸酶消化效果?

体系固定的情况下,核酸酶消化效果取决于酶用量、反应温度和反应时间。当反应温度较低时,为避免过多的核酸酶引起的残留问题,更加推荐延长反应时间来保证消化效果。


3.怎样灭活Pannarase核酸酶?如何去除?

·可逆抑制活性

采用EDTA螯合金属离子会可逆地抑制核酸酶活性

·不可逆灭活

极端条件会造成不可逆失活,例如100mM NaOH,70℃处理30min等

·核酸酶去除

阴离子交换层析(AEX)

氧离子交换层析(CEX)

切向流过滤(TFF)

凝胶过滤(如Sepharose 6FF)

*具体参数详见产品说明书


4.关于常用反应液和减少用量 ,你应该知道——

核酸酶常用缓冲液有哪些?产品能否减少用量?

搭配核酸酶可使用一些常用生物缓冲液,如TBS、MOPS(pH6-8)等。

为了减少残留,需要减少酶的用量,则可酌情提高反应温度或延长时间。


以上是我们关于核酸酶使用的更深一步的技巧介绍,后续我们会持续更新为您的实验提供更多参考,敬请关注!

相关产品信息:

Pannarase全能核酸酶五大特点:

·杰出单位比酶活,更高效的核酸降解能力

·规范的液相标准品定量,出色的质谱均一性认证

·严格的质控标准,确保单位酶活的准确性以及批次间稳定性

·无动物源性物料

·先进的生产工艺,非传统His标签纯化,排除引入金属离子风险



Pannarase全能核酸酶订购信息

货号名称规格
CYG002F0010Pannarase全能核酸酶100,000 U
CYG002F0050Pannarase全能核酸酶500,000 U
CYG002F0500Pannarase全能核酸酶5,000,000 U
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