胰蛋白酶是生物制药生产流程里的核心原料，目前行业使用的动物源胰酶虽具备来源充足、成本低廉的优势，但因提取自动物胰脏，也伴随诸多难以避免的安全风险。动物病毒、支原体、朊病毒等污染物，始终是使用动物源原料的生物制药企业头顶悬着的达摩克利斯之剑。

使用动物源胰酶，企业需要应对哪些挑战？

1. 外源性病毒的入侵风险

动物源性蛋白中可能混有哺乳动物病毒，绝大多数生物制药的纯化工艺都设置了病毒失活工序，但仍有部分病毒对常规灭活方案具备较强抵抗力；除此之外，部分活病毒疫苗本身无法经过病毒灭活步骤处理。因此，只要使用动物源胰酶，病毒污染的风险就始终存在。

表1. 主要病毒灭活工艺和去除方法

2010年，G公司和M公司两款已获批上市的小儿轮状病毒疫苗被检测出含有猪病毒DNA序列污染，后续调查确认污染来源为疫苗细胞生产过程中使用的动物源胰蛋白酶。尽管目前尚未发现该猪病毒具备人类传染性，相关疫苗仍维持上市状态，但也足以说明，病毒污染是使用动物源原料无法去除的固有问题。

2. 朊病毒、支原体等其他污染同样值得警惕

图1. 朊蛋白同化

朊病毒蛋白难以通过现有工艺去除或灭活，常规检测也很难发现它的存在，这类风险本身也很难量化评估。业界对朊病毒通过生物制品传播的担忧，正是推动生物制药生产转向无动物源(AOF)试剂的核心动力。

图2. 支原体结构

使用动物源胰蛋白酶制剂还可能引入支原体等污染物，其中以猪支原体最为常见。支原体可以在胰蛋白酶溶液中长期存活，因此使用猪源性胰蛋白酶，极有可能给培养中的细胞带来支原体污染。

对于选择使用动物源性胰蛋白酶开发生产工艺的企业而言，如今还面临额外的监管障碍：

图3. CBER关于动物源胰蛋白酶要求

CBER发布的工业指南中专门设有针对胰蛋白酶的相关章节，明确要求需要根据胰蛋白酶的来源（牛源或猪源）补充开展额外检测。

图4. 欧洲药品管理局关于动物源胰酶的说明

欧洲药品管理局发布的《关于人用生物药品生产中使用猪胰蛋白酶的指南草案》提出，需要使用两种不同细胞系对猪胰蛋白酶中可能存在的未知因子进行检测，企业需要完成额外的测试工作。

想要解决动物源原料带来的各类问题，有效的方案之一就是采用重组技术生产胰酶，通过微生物发酵得到的重组胰酶是安全性更高的替代产品。由于排除了动物来源原料，重组胰酶在产品纯度、酶活以及稳定性方面都有更可靠的保障。

逐典生物目前推出两款非动物源重组胰酶产品：Trypelectase重组胰蛋白酶冻干粉和TrypLUS消化液。

该产品氨基酸序列与猪胰腺来源的胰蛋白酶一致，由大肠杆菌（E.coli）重组表达生产，在GMP级环境下制备生产，产品质量符合药典要求。

作为胰蛋白酶类似物（Trypsin Like Enzyme），它拥有和胰蛋白酶相近的解离动力学，同时具备稳定性更高、纯度更好、消化更温和、细胞毒性更低的优势。

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