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答疑小课堂 | 逐典细胞因子常见问题解答

发布日期:2023-08-09 浏览量:916

逐典细胞因子优势

1.非标签纯化
2.特异性强,纯度高
3.全面覆盖各类细胞培养所需
4.规格可根据需求定制
5.GMP和科研级别均可提供
6.具有改良型产品:IL-2 Pro拥有更高溶解度,IL-15 Pro 拥有更高活性
细胞因子(cytokine,CK)是由多种组织细胞(主要为免疫细胞)所合成和分泌的小分子多肽或糖蛋白。细胞因子能介导细胞间的相互作用,具有多种生物学功能,如调节细胞生长、分化成熟、功能维持、调节免疫应答、参与炎症反应、创伤愈合和肿瘤消长等。
常见问题
问:常见细胞因子有哪些?有什么功能?
答:(1) 白细胞介素(interleukin, IL):由淋巴细胞、单核细胞或其它非单个核细胞产生的细胞因子,在细胞间相互作用、免疫调节、造血以及炎症过程中起重要调节作用,凡命名的白细胞介素的cDNA基因克隆和表达均已成功,已报道有三十余种(IL-1―IL-38)。
(2) 集落刺激因子(colony stimulating factor, CSF):根据不同细胞因子刺激造血干细胞或分化不同阶段的造血细胞在半固体培养基中形成不同的细胞集落,不同CSF不仅可刺激不同发育阶段的造血干细胞和祖细胞增殖的分化,还可促进成熟细胞的功能。
(3) 干扰素(interferon, IFN)各种不同的IFN生物学活性基本相同,具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用。
(4) 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF):两类TNF基本的生物学活性相似,除具有杀伤肿瘤细胞外,还有免疫调节、参与发热和炎症的发生。大剂量TNF-α可引起恶液质,因而TNF-α又称恶液质素(cachectin)。
问:细胞因子冻干产品的使用要注意什么?
答:冻干粉产品在运输过程中会有粉末黏在管壁或盖上,使用前请勿开盖并离心处理 20-30 秒(高速离心机,约13000 rpm),使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。亦可使用最高转速为4000-4500rpm的离心机离心5分钟(3000-3500rpm),也能达到类似的效果。虽然有时管中蛋白粉末不可见或者可视数量很少,我们的质控体系保证每管中所含的蛋白量是准确且足量的。
问:细胞因子冻干产品如何溶解?
答:(1) 使用前准备:使用前先离心(见上文),使附于管盖或管壁的蛋白沉于管底;
(2) 溶解液
① 要求用无菌去离子水溶解的产品,务必不可用盐溶液,避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出;不可用PBS或培养液(1640或DMEM等)直接溶解,否则蛋白可能无法完全溶解,从而导致蛋白活性不足或失活;
② 要求用盐溶液溶解的产品,请依照说明书上的浓度,同样也是为了避免过高的盐浓度;
③ 亦可联系我们的技术支持获得关于单独产品的溶解液的选择。
(3) 溶解到指定的浓度:
① 我们建议最佳浓度一般不低于100 μg/mL,如10μg的冻干粉,则加入10 μL-100μL的溶解液;
② 高于或低于最佳浓度,细胞因子可能会不稳定,或者聚集(aggregation),导致部分蛋白沉淀,影响其活性。高于这个浓度范围,可能会超过该蛋白的最大溶解浓度,即蛋白无法完全溶解;
③ 用移液枪轻吹混匀,或将管盖盖好后轻柔颠倒数次进行混匀,低速离心数秒;溶解时不可振荡(vortex,即用涡旋仪进行快速振荡),避免因化学键的断裂造成蛋白失活;
④ 将溶解后的蛋白在室温放置数分钟,以保证蛋白能够充分溶解。建议将不易溶解(slow to dissolve)的蛋白用低速摇床促进其溶解。
(4) 溶解后的保存:
不建议用推荐的溶解液做进一步稀释。溶液中的蛋白很容易黏附在冻存管壁,且很难与管壁分离。使用含有载体蛋白的溶液(该溶液通常是指pH近中性,有一定缓冲能力的缓冲液,如PBS,培养液等)预先封闭塑料管壁上的蛋白结合位点,使细胞因子或重组蛋白不会黏于管壁,方可更好地保存蛋白溶液;
① 短期保存:在一般情况下,上文中建议的浓度是较高的。我们建议将该溶液用含载体蛋白(如0.1% BSA、10% FBS、5% HSA)的溶液进行稀释,分装存于4℃并于一周内用完,分装体积不要小于20μL。否则稀释后的细胞因子或重组蛋白很容易会粘附在管壁或瓶壁上,使得溶液中的细胞因子或重组蛋白的浓度下降,从而影响其生物活性;
② 长期保存:若配置的溶液无法一次用尽,我们建议用含载体蛋白(如0.1% BSA、10% FBS、5% HSA)的溶液进一步稀释,分装冻存于-20℃至-80℃,分装体积不要小于20μL;
③ 在做无血清培养或动物的体内实验时,细胞因子中不能含有BSA,FBS或HSA等动物或人的成分,我们建议选用小包装,每次使用一支,用后即废弃。或者用含5%海藻糖(Trehalose)的溶液来稀释已溶解的细胞因子或重组蛋白,然后分装冻存,分装体积不要小于20μL。
问:重组蛋白的检测都有哪些?
答:基因序列:经N端序列分析。必要时,使用SDS-PAGE,HPLC和质谱分析等方法与标准品进行比对;
蛋白纯度:
(1) 经SDS-PAGE
(2) HPLC分析
生物活性:经相关的体外或体内生物活性检测,详见下文;
蛋白含量:
(1) 紫外分光光度
(2) BCA蛋白定量测定
(3) SDS-PAGE分析
(4) HPLC法与标准品比对
内毒素含量:经动态LAL(西方鲎试剂)法或TAL(东方鲎试剂)法测定;
无菌:所有蛋白溶液在分装冻干前经0.22um滤膜过滤除菌,在B+A级环境分装、冻干及封盖;
分子量:SDS-PAGE分析;
宿主蛋白残留:荧光染色;
宿主DNA残留:ELISA试剂盒;
支原体检测:支原体试剂盒。
问:重组蛋白的生物活性是什么?
答:蛋白质的生物活性是各种蛋白质功能的体现。或者您可以理解只有蛋白质有活性的概念,它才能执行它的功能。具有生物活性的蛋白质称为活性蛋白质,即具有生物活性的活性蛋白质。从理论上讲,天然蛋白都是活性蛋白,而重组蛋白并不总是活性蛋白,因为重组蛋白的产生是一个复杂的过程,其中许多因素对其生物活性至关重要,例如理想的表达系统、合适的表达载体、纯化等。
1. ED50的计算:
逐典的蛋白产品ED50(即半数有效浓度,其定义是对特定细胞引起 50% 最大反应的蛋白浓度,单位为ng/mL)可在蛋白产品COA中获取,这种活性表示法仅适用于剂量反应曲线呈 S 形的细胞因子。将1 ng/mL ED50 定义为 1 unit,则产品生物学活性 Specific Activity 的换算公式如下:
Specific Activity(units/mg)= 1 × 10 6 ÷ ED50(ng/mL)
以上计算公式并不适用于International Units(IU)和ED50的换算关系,我们建议采用国际标准品对比相同实验获得该蛋白的IU值。
2. 影响ED50的因素:
产品说明书中的实验方案只是确认该产品的ED50,如果客户的实验类型与我们相同,则可以按照产品标定的生物活性进行实验;若实验采用了不同的细胞种类或方法,我们建议客户按照梯度浓度通过实验获得最佳ED50值,并依据此数值制定相应的实验方案以及产品的添加量。

https://cdn.juplus.cn/2172023525152317519.pdf

(点击查看下载详细的产品介绍)


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