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细胞因子冻干产品如何溶解?

发布日期:2023-08-09

(1) 使用前准备:使用前先离心(见上文),使附于管盖或管壁的蛋白沉于管底;

(2) 溶解液
① 要求用无菌去离子水溶解的产品,务必不可用盐溶液,避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出;不可用PBS或培养液(1640或DMEM等)直接溶解,否则蛋白可能无法完全溶解,从而导致蛋白活性不足或失活;
② 要求用盐溶液溶解的产品,请依照说明书上的浓度,同样也是为了避免过高的盐浓度;
③ 亦可联系我们的技术支持获得关于单独产品的溶解液的选择。

(3) 溶解到指定的浓度:

① 我们建议最佳浓度一般不低于100 μg/mL,如10μg的冻干粉,则加入10 μL-100μL的溶解液;
② 高于或低于最佳浓度,细胞因子可能会不稳定,或者聚集(aggregation),导致部分蛋白沉淀,影响其活性。高于这个浓度范围,可能会超过该蛋白的最大溶解浓度,即蛋白无法完全溶解;
③ 用移液枪轻吹混匀,或将管盖盖好后轻柔颠倒数次进行混匀,低速离心数秒;溶解时不可振荡(vortex,即用涡旋仪进行快速振荡),避免因化学键的断裂造成蛋白失活;

④ 将溶解后的蛋白在室温放置数分钟,以保证蛋白能够充分溶解。建议将不易溶解(slow to dissolve)的蛋白用低速摇床促进其溶解。

(4) 溶解后的保存:
不建议用推荐的溶解液做进一步稀释。溶液中的蛋白很容易黏附在冻存管壁,且很难与管壁分离。使用含有载体蛋白的溶液(该溶液通常是指pH近中性,有一定缓冲能力的缓冲液,如PBS,培养液等)预先封闭塑料管壁上的蛋白结合位点,使细胞因子或重组蛋白不会黏于管壁,方可更好地保存蛋白溶液;
① 短期保存:在一般情况下,上文中建议的浓度是较高的。我们建议将该溶液用含载体蛋白(如0.1% BSA、10% FBS、5% HSA)的溶液进行稀释,分装存于4℃并于一周内用完,分装体积不要小于20μL。否则稀释后的细胞因子或重组蛋白很容易会粘附在管壁或瓶壁上,使得溶液中的细胞因子或重组蛋白的浓度下降,从而影响其生物活性;
② 长期保存:若配置的溶液无法一次用尽,我们建议用含载体蛋白(如0.1% BSA、10% FBS、5% HSA)的溶液进一步稀释,分装冻存于-20℃至-80℃,分装体积不要小于20μL;
③ 在做无血清培养或动物的体内实验时,细胞因子中不能含有BSA,FBS或HSA等动物或人的成分,我们建议选用小包装,每次使用一支,用后即废弃。或者用含5%海藻糖(Trehalose)的溶液来稀释已溶解的细胞因子或重组蛋白,然后分装冻存,分装体积不要小于20μL。