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逐典Chaselection-全能核酸酶常见问题答疑

发布日期:2023-12-28 浏览量:137

Q1:核酸酶适用于哪些领域的哪些环节?

A1:核酸酶主要用于去除下游纯化中的HCD,降低粘度。应用领域主要集中在基因治疗、细胞治疗的病毒载体生产,使用环节是下游纯化,UFDF环节之前。

 

Q2:核酸酶的使用浓度是多少?

A2:一般的病毒载体纯化使用浓度是20-50 U/ml,溶瘤病毒的话使用浓度会高一些,可能会到100-150 U/ml。

 

Q3:蛋白不溶,需要在变性条件下纯化,pannarase核酸酶可以在尿素环境下消化核酸么?

A3:核酸酶在6M尿素条件下活性先增加,当尿素浓度到7M时,核酸酶会在15min后变性失活。因此在这个浓度下可适当提高核酸酶添加量补偿活性损失。

 

Q4:当反应温度低于37℃,如何保证pannnarase的消化效果?

A4:体系固定的条件下,核酸酶的消化效果取决于酶的用量、反应温度和反应时间。温度较低时,建议延长酶解时间,避免加入过多核酸酶造成残留过高。

 

Q5:怎样灭活pannarase核酸酶?如何去除?

A5:使用EDTA螯合金属离子可以可逆的抑制核酸酶的活性,极端条件会造成失活,如100mM NaOH,70℃处理30min等。核酸酶可采用阴离子交换柱从产物中分离出去。

 

Q6:产品应如何进行稀释?

A6:正确稀释比例是1:1000~1:20000,原储存液中含有50%甘油,酶液不会在-20℃冻结,但在不含甘油的缓冲稀释液中的酶需要尽快用掉,不推荐冻结后再次使用。

 

Q7:核酸酶的去除方法有哪些?

A7:切向流过滤、色谱法、滤器、阴离子层析等。

 

Q8:细菌或细胞裂解液里的核酸酶应该如何去除?

A8:随着工艺去除杂蛋白时会一并去除,不用特意纯化 。

 

Q9:Pannarase耐高盐核酸酶的来源与特点?

A9: Pannarase耐高盐核酸酶(EC 3.1.31.1)是一种来源于Staphylococcus aureus的热稳定非特异性核酸内切酶(Thermonuclease),具有耐盐和高温稳定性。

Q10:耐高盐核酸酶的盐离子耐受范围

A10:0-500 mM NaCl均能保持活性15%以上。

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