在AAV（腺相关病毒）基因治疗载体的生产工艺中，核酸酶的使用几乎是标配。但很多研发团队在工艺开发阶段都会遇到一个问题：核酸酶到底应该在什么时候加？是细胞收获时就加入上清液，还是等细胞裂解后再加到裂解液里？
这个问题看似只是工艺顺序的小调整，实则直接影响核酸去除效率、AAV颗粒回收率以及后续纯化的负担。今天我们就来系统拆解两种添加策略的适用场景与核心差异。
01｜收获液中加核酸酶：上清游离核酸的前置处理
AAV生产中，部分病毒颗粒会在细胞培养过程中分泌到上清液中，同时伴随的还有细胞裂解释放的游离DNA、RNA以及培养基中的核酸碎片。如果在收获时就向上清液中加入核酸酶，可以在收获阶段就先降解掉这部分游离核酸，降低体系黏度。
这种策略的核心优势在于：
降低收获液黏度，减少后续澄清过滤的堵塞风险；
避免上清中游离核酸与AAV颗粒发生非特异性结合，减少纯化阶段的去除压力；
对于采用贴壁细胞、分次收获的工艺，多次收获后统一处理时，前置核酸酶处理能明显提升澄清效率。
但需要注意的是，收获液中的AAV尚未从细胞内释放，此时核酸酶只能作用于胞外的游离核酸，对细胞内的宿主基因组DNA无能为力。
02｜裂解液中加核酸酶：胞内核酸的集中处理
AAV主要在细胞内组装，最终收获需要通过细胞裂解释放病毒颗粒。裂解过程会释放大量宿主细胞基因组DNA、RNA以及残余质粒DNA，这些核酸会导致裂解液黏度急剧升高，严重影响后续澄清、层析和超滤操作。
在裂解液中加入核酸酶，是绝大多数AAV工艺的标准操作。此时核酸酶面对的是高浓度、高分子量的宿主核酸，需要在短时间内将其降解为小片段，以降低黏度并减少核酸对AAV颗粒的缠绕。
这种策略的关键点在于：
裂解后核酸大量释放，必须匹配足够酶活的核酸酶才能在限定时间内完成降解；
如果裂解工艺采用高盐条件（如600-700 mM NaCl），则需要选择耐高盐型核酸酶，否则普通核酸酶在高盐下活性会显著下降；
裂解温度和时间窗口需要与核酸酶的最适条件匹配，否则核酸降解不充分会直接卡住下游纯化。
03｜两种策略怎么选？看工艺阶段与盐浓度
实际生产中，很多成熟工艺并不是二选一，而是根据工艺阶段灵活组合。我们可以用一个简单的逻辑来判断：
如果你的AAV以分泌型为主、收获液中游离核酸已经造成澄清困难——可以在收获阶段前置加入常规全能核酸酶；
如果你的裂解工艺采用了高盐释放策略——裂解液中必须使用耐高盐核酸酶（如逐典Pannarase耐高盐系列），否则酶活跟不上；
如果你的工艺同时包含收获上清处理和裂解液处理——建议两个阶段都加，但根据各阶段的盐浓度和核酸负荷选择对应型号。
一个常见的优化路径是：收获时用常规全能核酸酶处理上清 → 裂解后根据盐浓度选择耐高盐核酸酶处理裂解液 → 两阶段协同，实现全流程核酸可控。
逐典Pannarase全能核酸酶系列
逐典生物Pannarase全能核酸酶家族覆盖从常规盐浓度到700 mM高盐的全场景需求，已完成美国FDA DMF备案，直接支持IND/NDA申报。
✔ Pannarase全能核酸酶：常规盐浓度工艺首选，高效降解DNA/RNA，降低体系黏度
✔ Pannarase耐高盐核酸酶：0-500 mM NaCl工艺体系适配
✔ Pannarase高盐耐受型（SAN）：600-700 mM NaCl高盐裂解工艺专用
✔ DMF备案，可直接引用编号，简化申报流程
核酸酶的选择不是一成不变的，它需要跟你的工艺阶段、盐浓度、核酸负荷动态匹配。选对时机、选对型号，才能让核酸处理这一步真正成为工艺的助力，而不是卡点。
