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CHASELECTION D-萤光素钾盐



D-萤光素是萤光素酶的常用底物,在Mg2+、ATP存在条件下与萤光素酶发生反应,生成二氧杂环丁烷结构,并产生发光现象。在萤光素过量条件下,产生的光子数与酶的浓度呈正相关性。这类发光反应可用于启动子优化,药物筛选,细胞ATP水平分析等实验。


D-萤光素钾盐拥有较好的水溶性和脂溶性,相较于D-萤光素(游离酸)能更好应用于体外活细胞和体内活体生物发光成像等研究。

产品信息
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Q&A
应用文献

产品性质

产品别名

D-虫萤光素钾盐; 5-氟-萤光素

CAS号

115144-35-9

分子式

C11H7N2KO3S2

分子量

318.4

外观

淡黄色粉末

溶解性

易溶于水

纯度(HPLC)

≥99%


产品用途:

报告基因分析

细胞体外生物发光分析

体内活体成象分析

高灵敏度ATP分析

其他萤光素酶及其基因相关的研究


贮存条件及效期

-20℃避光干燥保存,有效期1年。冰袋运输。

工作液现配现用,储存液-20℃分装储存,避免反复冻融,在3个月内使用。


使用说明

1. 体外生物发光分析

1)储存液的制备

将1.0g D-萤光素钾盐溶解于33.3mL 无菌水中配制成30mg/mL的储存液,或配制单次实验所需的D-萤光素钾盐溶液。

2)体外活细胞生物发光检测

a. 接种外源过表达萤火虫萤光素酶的细胞在培养板上;

b. 将配制好的D-萤光素钾盐储存液用细胞培养基稀释成150μg/ml的工作液;

c. 移除细胞培养板中培养基,加入D-萤光素钾盐工作液于37°C孵育10min后用于细胞成像。


2. 体内活体成像分析

1)D-萤光素钾盐溶液制备

将1.0g D-萤光素钾盐在DPBS(w/o Ca2+,Mg2+)中溶解配制成15mg/mL,或配制单次实验所需的D-萤光素钾盐溶液,使用0.2 μm滤膜过滤除菌。

2)体内活体生物发光的检测

a. 以10μL/g体重确定注射量。每只小鼠接受150 mg D-萤光素钾盐/kg体重(如对于体重为10 g的小鼠,需要注射100 μL以提供1.5 mg D-萤光素钾盐);

b. 在活体成像前10-15min腹腔注射D-萤光素钾盐溶液,或根据动力学曲线确定具体时间。


3. 模型动物萤光素酶活性的动力学曲线

1) 将D-萤光素钾盐以15mg/ml溶解于DPBS(w/o Ca2+,Mg2+)中,腹腔注射,工作剂量为150mg /kg。

2) 等待3min,然后给动物进行常规麻醉(气麻、针麻皆可);

3) 将麻醉后的动物放置在成像室并拍摄第一张图像。

4) 每5-10min连续拍照,持续40min,获得模型动物的D-萤光素钾盐吸收动力学曲线。

5) 根据动力学曲线确定最佳成像时间。


注意事项:

1)最佳成像时间受注射方式、动物类型以及体重等的影响,因此建议每次实验都要做萤光素酶动力学曲线,以确定最佳信号平台期和最佳检测时间。

2)如果要进行ATP相关检测,尽量避免外源ATP的污染,如操作时戴手套并使用ATP-free的实验耗材,在进行萤光素的溶解时应使用ATP-free无菌水。

3)本品需进行避光操作和保存。储存液过滤除菌后可分装于-20℃或-80℃冻存。如果有条件,可对储存液充入氮气或氩气(防止氧化)。

4)在进行D-萤光素钾盐的溶解时,应使用无钙镁离子的DPBS,钙镁离子可能会抑制萤光素酶的活性,此外镁离子可能会对萤光素的氧化造成影响,从而影响检测。

5)本产品仅作科研用途!


订购信息:

产品货号
名称
规格
CY057F0100
D-萤光素钾盐
0.1g
CY057F1000
D-萤光素钾盐
1g


Q:配置好的D-萤光素钾盐溶液如何储存?

A:理想情况下,配置好的储存液可于-20储存较短时间,工作液现配现用。如有必要,萤光素溶液可储存在-20°C长达3周。值得注意的是在任何一种温度下长时间存储都可能导致信号退化。


Q:D-萤光素钾盐的建议用量是多少?

A:1)活体成像:

10μL/g体重确定注射量。每只小鼠接受150 mg D-萤光素钾盐/kg体重(如对于体重为10 g的小鼠,需要注射100 μL以提供1.5 mg D-萤光素钾盐)。

2体外成像

一般使用150μg/ml的工作液用于体外细胞成像。


Q:如何确定不同模型的峰值信号时间?

A:生物发光信号的动力学具有组织依赖性。建议每5-10min对动物进行一次成像,最多40min,为每个新模型创建一个动力学曲线。(常见信号峰值时间点在10-15min左右,萤光反应发光一般在30min后衰减,3h后完全消失。)具体详见说明书“萤光素动力学曲线制备”。


Q:常用的荧光成像仪器?

A:需要具有生物化学发光检测模块。

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