CHASELECTION D-萤光素钾盐

产品性质：

产品用途：

报告基因分析

细胞体外生物发光分析

体内活体成象分析

高灵敏度ATP分析

其他萤光素酶及其基因相关的研究

贮存条件及效期：

-20℃避光干燥保存，有效期1年。冰袋运输。

工作液现配现用，储存液-20℃分装储存，避免反复冻融，在3个月内使用。

使用说明：

1. 体外生物发光分析

1）储存液的制备

将1.0g D-萤光素钾盐溶解于33.3mL 无菌水中配制成30mg/mL的储存液，或配制单次实验所需的D-萤光素钾盐溶液。

2）体外活细胞生物发光检测

a. 接种外源过表达萤火虫萤光素酶的细胞在培养板上；

b. 将配制好的D-萤光素钾盐储存液用细胞培养基稀释成150μg/ml的工作液；

c. 移除细胞培养板中培养基，加入D-萤光素钾盐工作液于37°C孵育10min后用于细胞成像。

2. 体内活体成像分析

1）D-萤光素钾盐溶液制备

将1.0g D-萤光素钾盐在DPBS（w/o Ca²⁺,Mg²⁺）中溶解配制成15mg/mL，或配制单次实验所需的D-萤光素钾盐溶液，使用0.2 μm滤膜过滤除菌。

2）体内活体生物发光的检测

a. 以10μL/g体重确定注射量。每只小鼠接受150 mg D-萤光素钾盐/kg体重（如对于体重为10 g的小鼠，需要注射100 μL以提供1.5 mg D-萤光素钾盐）；

b. 在活体成像前10-15min腹腔注射D-萤光素钾盐溶液，或根据动力学曲线确定具体时间。

3. 模型动物萤光素酶活性的动力学曲线

1) 将D-萤光素钾盐以15mg/ml溶解于DPBS（w/o Ca²⁺,Mg²⁺）中，腹腔注射，工作剂量为150mg /kg。

2) 等待3min，然后给动物进行常规麻醉(气麻、针麻皆可)；

3) 将麻醉后的动物放置在成像室并拍摄第一张图像。

4) 每5-10min连续拍照，持续40min，获得模型动物的D-萤光素钾盐吸收动力学曲线。

5) 根据动力学曲线确定最佳成像时间。

注意事项：

1）最佳成像时间受注射方式、动物类型以及体重等的影响，因此建议每次实验都要做萤光素酶动力学曲线，以确定最佳信号平台期和最佳检测时间。

2）如果要进行ATP相关检测，尽量避免外源ATP的污染，如操作时戴手套并使用ATP-free的实验耗材，在进行萤光素的溶解时应使用ATP-free无菌水。

3）本品需进行避光操作和保存。储存液过滤除菌后可分装于-20℃或-80℃冻存。如果有条件，可对储存液充入氮气或氩气（防止氧化）。

4）在进行D-萤光素钾盐的溶解时，应使用无钙镁离子的DPBS，钙镁离子可能会抑制萤光素酶的活性，此外镁离子可能会对萤光素的氧化造成影响，从而影响检测。

5）本产品仅作科研用途！

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