D-萤光素是萤光素酶的常用底物，在Mg2+、ATP存在条件下与萤光素酶发生反应，生成二氧杂环丁烷结构，并产生发光现象。在萤光素过量条件下，产生的光子数与酶的浓度呈正相关性。这类发光反应可用于启动子优化，药物筛选，细胞ATP水平分析等实验。
D-萤光素钾盐拥有较好的水溶性和脂溶性，相较于D-萤光素（游离酸）能更好应用于体外活细胞和体内活体生物发光成像等研究。
产品性质：
产品别名 | D-萤光素钾盐； 5-氟-萤光素 |
CAS号 | 115144-35-9 |
分子式 | C11H7N2KO3S2 |
分子量 | 318.4 |
外观 | 淡黄色粉末 |
溶解性 | 易溶于水 |
纯度（HPLC） | ≥99% |
产品用途：
报告基因分析
细胞体外生物发光分析
体内活体成象分析
高灵敏度ATP分析
其他萤光素酶及其基因相关的研究
贮存条件及效期：
-20℃避光干燥保存，有效期1年。冰袋运输。
工作液现配现用，储存液-20℃分装储存，避免反复冻融，在3个月内使用。
使用说明：
1. 体外生物发光分析
1）储存液的制备
将1.0g D-萤光素钾盐溶解于33.3mL 无菌水中配制成30mg/mL的储存液，或配制单次实验所需的D-萤光素钾盐溶液。
2）体外活细胞生物发光检测
a. 接种外源过表达萤火虫萤光素酶的细胞在培养板上；
b. 将配制好的D-萤光素钾盐储存液用细胞培养基稀释成150μg/ml的工作液；
c. 移除细胞培养板中培养基，加入D-萤光素钾盐工作液于37°C孵育10min后用于细胞成像。
2. 体内活体成像分析
1）D-萤光素钾盐溶液制备
将1.0g D-萤光素钾盐在DPBS（w/o Ca2+,Mg2+）中溶解配制成15mg/mL，或配制单次实验所需的D-萤光素钾盐溶液，使用0.2 μm滤膜过滤除菌。
2）体内活体生物发光的检测
a. 以10μL/g体重确定注射量。每只小鼠接受150 mg D-萤光素钾盐/kg体重（如对于体重为10 g的小鼠，需要注射100 μL以提供1.5 mg D-萤光素钾盐）；
b. 在活体成像前10-15min腹腔注射D-萤光素钾盐溶液，或根据动力学曲线确定具体时间。
3. 模型动物萤光素酶活性的动力学曲线
1) 将D-萤光素钾盐以15mg/ml溶解于DPBS（w/o Ca2+,Mg2+）中，腹腔注射，工作剂量为150mg /kg。
2) 等待3min，然后给动物进行常规麻醉(气麻、针麻皆可)；
3) 将麻醉后的动物放置在成像室并拍摄第一张图像。
4) 每5-10min连续拍照，持续40min，获得模型动物的D-萤光素钾盐吸收动力学曲线。
5) 根据动力学曲线确定最佳成像时间。
注意事项：
1）最佳成像时间受注射方式、动物类型以及体重等的影响，因此建议每次实验都要做萤光素酶动力学曲线，以确定最佳信号平台期和最佳检测时间。
2）如果要进行ATP相关检测，尽量避免外源ATP的污染，如操作时戴手套并使用ATP-free的实验耗材，在进行萤光素的溶解时应使用ATP-free无菌水。
3）本品需进行避光操作和保存。储存液过滤除菌后可分装于-20℃或-80℃冻存。如果有条件，可对储存液充入氮气或氩气（防止氧化）。
4）在进行D-萤光素钾盐的溶解时，应使用无钙镁离子的DPBS，钙镁离子可能会抑制萤光素酶的活性，此外镁离子可能会对萤光素的氧化造成影响，从而影响检测。
5）本产品仅作科研用途！
订购信息：
产品货号 产品名称 产品规格 CY057F0025 D-萤光素钾盐 25mg CY057F0100 D-萤光素钾盐 0.1g CY057F1000 D-萤光素钾盐 1 g
Q: D-萤光素钾盐的纯度是多少？纯度大小对实验有影响吗？
A: D-萤光素钾盐纯度≥99 %，萤光素纯度越高，相应污染物含量越低，相反则越高，污染物浓度过高将抑制某些酶和细胞中的生物学过程，可能会给实验结果带来偏差，并且可能会对实验动物造成伤害。
Q: D-萤光素钾盐溶解度是多少？其溶液稳定吗？
A: D-萤光素钾盐溶解度在40 mg/ml以上，其水溶液短期内存放于-80℃，对实验效果没有明显影响。对于部分条件较敏感的实验，为了控制实验中的可变因素，推荐反应液新鲜配制。例如，荧光素酶过低、非最适的反应条件等都需要高质量的底物才能进行反应。
Q: D-萤光素钾盐的建议用量是多少？
A: 活体成像：以10 μL/g体重确定注射量。每只小鼠接受150 mg D-萤光素钾盐/kg体重（如对于体重为10 g的小鼠，需要注射100 μL以提供1.5 mg D-萤光素钾盐）。
体外成像：一般使用150μg/ml的工作液用于体外细胞成像。
Tips: 注射方式、动物类型以及体重等都会影响信号的发射，需要适当摸索，待萤光信号达到最强稳定平台期，再用相应仪器进行成像分析。
Q: 配置好的D-萤光素钾盐溶液如何储存？
A: 工作液现配现用，理想情况下，配置好的储存液可于-20℃储存较短时间。如有必要，萤光素溶液可在-20℃储存长达3周。
Tips: 上述溶液在任何一种温度长时间贮存下都有可能导致信号退化哦！
Q: 萤光素（酶）底物的形式有哪些？
A: 分为D-萤光素游离酸、D-萤光素钾盐和D-萤光素钠盐，由于水溶性高，因此钾盐和钠盐通常是最通用的两种检测底物，其中又以钾盐作为活体动物检测使用的主要形式。
Q: 如何确定不同模型的峰值信号时间?
A: 生物发光信号的动力学具有组织依赖性。建议每5-10min对动物进行一次成像，最多40 min，为每个新模型创建一个动力学曲线。(常见信号峰值时间点在10-15 min左右，萤光反应发光一般在30 min后衰减，3 h后完全消失。)具体详见逐典D-萤光素钾盐说明书“萤光素动力学曲线制备”。
Q: 萤光素底物可以透过血脑屏障吗？
A: 萤光素底物约280 Da，萤光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透细胞膜和血脑屏障。
Q: 萤光素酶的表达稳定性如何？
A: 萤光素酶基因能够通过稳定筛选等过程插到细胞染色体内，当细胞进行分裂、转移、分化从而进行持续稳定的表达，萤光素酶的半衰期约为3 h，故只有活细胞才能持续表达萤光素酶。
