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AAV病毒纯化不再难!实用策略助你轻松应对?

发布日期:2024-05-28 浏览量:104

在AAV(腺相关病毒)的纯化过程中,为了最大化病毒的回收率,研究者们常常会遇到一系列挑战。本文将探讨这些挑战,并给出相应的应对策略,帮助大家更好地应对AAV纯化的难题。

一、高盐浓度环境下的挑战

挑战:为了增强病毒的稳定性,我们通常会使用较高盐浓度的buffer(200-500 mM)。然而,传统的全能核酸酶在高盐条件下活性会大幅下降,这使得去除核酸污染变得更为困难。

应对:采用耐高盐的全能核酸酶,这类酶在高盐环境中依然能保持高活性,是去除核酸污染的理想选择。通过使用这类酶,我们可以更高效地去除残留的核酸,提高病毒纯度。

二、宿主DNA去除的挑战

挑战:宿主DNA通常以染色质形式存在,容易被蛋白包裹,导致DNA无法暴露,增加了去除的难度。

应对:在高盐环境下,核酸和蛋白质能有效分离。因此,我们可以在高盐条件下进行纯化操作,使宿主DNA与蛋白质分离,从而更容易去除残留的DNA。

三、病毒颗粒聚集的挑战

挑战:AAV等病毒载体会因静电相互作用而发生聚集,尤其在低离子强度和残留DNA的情况下更易聚集,这会导致病毒稳定性降低和得率减少。

应对:通过提高盐浓度,我们可以有效减少AAV病毒颗粒的聚集。这是因为高盐环境能够中和病毒颗粒之间的静电相互作用,从而防止聚集。同时,确保在纯化过程中去除残留DNA,也是减少病毒颗粒聚集的关键。

四、纯化技术选择的挑战

挑战:在AAV纯化过程中,选择合适的纯化技术对于提高病毒回收率和纯度至关重要。然而,不同的纯化技术各有优缺点,选择起来十分困难。

应对:我们可以采用如阴离子交换层析等先进技术。这种技术利用完整衣壳与空衣壳之间的微小差异,通过离子交换层析实现高效纯化。同时,阴离子交换层析能够在保持较高病毒回收率的同时,提高病毒的纯度。

AAV病毒纯化过程中面临的挑战多种多样,但只要我们掌握正确的应对策略,就能轻松应对这些挑战。通过采用耐高盐的全能核酸酶、在高盐环境下进行纯化操作、提高盐浓度防止病毒颗粒聚集以及选择合适的纯化技术等方法,我们可以最大化病毒的回收率,同时保证病毒的纯度。

为更好满足AAV病毒纯化过程中高盐环境对全能核酸酶的活性要求, 逐典生物自主开发出超耐高盐版本全能核酸酶,在高盐条件下,仍具有高酶活,是AAV病毒生产及其它生物工艺流程中去除核酸污染的理想选择。

五,逐典超耐高盐全能核酸酶优势

1.更高盐耐受度

当盐离子浓度在600~700mM时,初代全能核酸酶几近失活,而SAN仍能保持较高活性。

图1.不同盐浓度下耐高盐全能核酸酶(SAN)与初代全能核酸酶活性对比

2.高效核酸降解力

同对照组相比,添加SAN后能够有效去除核酸残留。

图2 加入SAN 前后的消化效果图

六,逐典耐高盐核酸酶应用案例:

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