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D-荧光素钾盐的原理和使用方法

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萤光素酶与萤光素底物反应产生的发光现象多应用于生物发光成像。利用萤光素酶基因标记细胞,注射萤光素底物后检测萤光强度,可实时监 测目的细胞的生长状况与药物使用效果。由于萤光反应中还涉及ATP,因而也可利用ATP对体系的影响指示能量或生命状态。


一,D-荧光素钾盐的原理

萤光素酶在ATP、Mg2+和O2的条件下催化D-萤光素钾盐进行氧化脱羧反应,发出平均波长为560nm的蓝绿色荧光。当萤光素钾盐过

量时,产生的光量子数与萤光素酶的浓度呈正相关性。由于其方便检测、定量准确、在生物技术领域有着非常广泛的应用,特别是体内活体成

像领域和报告基因技术领域。


 

二,D-荧光素钾盐的使用方法


1. 溶液的制备
D-荧光素钾盐的溶液可以用于染色、标记、检测等多种应用。
制备D-荧光素钾盐溶液的方法:
a.首先称取适量的D-荧光素钾盐,加入适量的去离子水中后进行均匀搅拌;
b.使用过滤膜将溶液过滤,除菌。
c.将D-荧光素钾盐溶液调节至所需要的浓度。


2. 染色实验过程
D-荧光素钾盐可以用于细胞染色、组织染色等染色实验,实验方法如下:
a.首先将细胞或组织样本固定在载玻片上。
b.然后加入适量的D-荧光素钾盐溶液,使试剂溶液可以覆盖样本。
c.在黑暗条件下可以孵育一段时间,使D-荧光素钾盐充分渗透入细胞或组织中。
d.使用PBS缓冲液洗涤样本,去除多余的D-荧光素钾盐。
e.在显微镜下观察样本,观察样品的荧光信号。


3. 实验标记
D-荧光素钾盐也可以用于标记蛋白质、核酸等生物分子。
实验标记方法:
a.首先将蛋白质或核酸与d-荧光素钾盐共同孵育。
b.再用凝胶电泳等方法分离标记后的生物分子。
c.最后在荧光显微镜下观察标记后的生物分子即可。


4. 检测方法
D-荧光素钾盐可用于检测生物分子的存在和浓度。
D-荧光素钾盐检测方法:
a.将d-荧光素钾盐与待检测的生物分子进行共同孵育。
b.用凝胶电泳等方法分离孵育后的混合物。
c.在荧光显微镜下观察荧光信号,即可判断生物分子的存在和浓度。

 

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